Bases bioquimicas de métodos para la determinación de Hemoglobina Glicosilada en sangre.



La hemoglobina es una proteína que se encuentra en los hematíes y sirve para brindarle oxígeno al resto de las células y tejidos, esta proteína se une a la glucosa circulante por el torrente sanguíneo. El porcentaje de
proteína unida a la glucosa es lo que se denomina HEMOGLOBINA GLICOSILADA


HEMOGLOBINA GLICOSILADA (HbA1c)

La hemoglobina glicosilada se define como un análisis donde se muestra el nivel promedio de glucosa en sangre en las últimas 6-8 semanas. Si la sangre contiene más azúcar, la hemoglobina glicosilada aumente sobre todo, permanece aumentada durante 120 días. Es por esta razón, que la medición de la hemoglobina glicosilada refleja todos los aumentos o disminuciones del azúcar en sangre durante este período de tiempo.
TÉCNICAS
Para medir la fracción de hemoglobina glicosilada existen diversas técnicas, en las que encontramos:

1. Electroforesis
2. Cromatografía.

La electroforesis consiste en la separación de moléculas en un campo eléctrico que puede realizarse sobre la superficie hidratada de un soporte sólido (p. ej., electroforesis en papel o en acetato de celulosa) o bien a través de una matriz porosa (electroforesis en gel), o bien en disolución (electroforesis libre). Dependiendo de la técnica que se use, la separación obedece en distinta medida a la carga eléctrica de las moléculas y a su masa.

La variante de uso más común para el análisis de mezclas de proteínas o de ácidos nucleicos utiliza como soporte un gel, habitualmente de agarosa o de poliacrilamida.

Para la obtención de ELECTROFORESIS PROTEICA, existen diferentes métodos:

1. Electroforesis de zona: La carga neta de las proteínas dependen del pH del medio. Normalmente, la separación electroforética de proteínas se hace a pH alcalino, en el que la mayoría de las proteínas presentan una carga global negativa. También se puede trabajar a pH ácidos, pero no demasiado bajos, ya que las proteínas precipitan en medio ácido (básicamente se usa en la detección de variantes de la hemoglobina).
   Como medio de soporte se puede usar: papel, acetato de celulosa, agarosa, poliacrilamida y electroforesis capilar. La muestra cuyas proteínas se quieren separar se inserta en un medio de soporte y se aplica una diferencia de potencial durante un tiempo determinado para separar las proteínas. Cada proteína migrará más o menos en función de su carga (que también determina hacia qué polo se dirigirá la proteína, ánodo (+) o cátodo (-)) y su tamaño. A mayor carga y menor tamaño, más velocidad de migración.
2. Isoelectroenfoque En lugar de separar las proteínas en función de su carga a un pH dado, se separan en función de su punto isoeléctrico (pI): el pI es el pH en el que la carga neta de la proteína es nula, y depende de la composición aminoacídica de la proteína. Se crea un gradiente de pH mediante anfolitos (estabilizan el pH a lo largo del gel). Cada proteína migrará hasta alcanzar su pI, punto en el cual precipitará al acumularse.

El objetivo de la cromatografía es separar los distintos componentes de una mezcla, permitiendo identificar y determinar las cantidades de dichos componentes.

Los componentes de la mezcla interaccionan en distinta forma con la fase estacionaria y con la fase móvil. De este modo, los componentes atraviesan la fase estacionaria a distintas velocidades y se van separando. Después de que los componentes hayan pasado por la fase estacionaria, separándose, pasan por un detector que genera una señal que puede depender de la concentración y del tipo de compuesto.

Las distintas técnicas cromatográficas se pueden dividir según cómo esté dispuesta la fase estacionaria:

FASE ESTACIONARIA
TIPO	CARACTERÍSTICAS
Cromatografía plana	La fase estacionaria se sitúa sobre una placa plana o sobre un papel. Las principales técnicas son: Cromatografía en papel y cromatografía en capa fina.
Cromatografía en columna	La fase estacionaria se sitúa dentro de una columna. Según el fluido empleado como fase móvil se distinguen: Cromatografía de gases, líquidos y fluidos supercríticos

El método cromatográfico detectaba solamente la fracción HbA1; el método actual mide la fracción HbA1c que es la mayor concentración y la más estable. La determinación de HbA1c usada monitorea el último período de 6 a 8 semanas del paciente diabético.


Los valores normales* de HbA1c son:

• Adultos normales: 2,2 a 6 %
• Niños normales: 1,8 a 4%
• Diabéticos bien controlados: 2,5 a 5.9%
• Diabéticos con control suficiente: 6 a 8%
• Diabéticos mal controlados: Mayor de 8%

* Estos valores pueden variar según los laboratorios.

Debido a que el paciente Calixto Romero presenta diabetes mellitus tipo II, este análisis se utiliza para saber si el control que realiza el paciente sobre la enfermedad ha sido bueno durante los últimos 3 o 4 meses (Para este tipo de diabeticos se recomienda realizar la hemoglobina glicosilada cada 6 meses).

Al realizarse las evaluaciones posteriores por consulta externa, la hemoglobina glicosilada del paciente arrojó el siguiente dato: 10.6 mgr/dl. Lo cual indica que el paciente no se ha controlado de forma adecuada durante los últimos 120 días y a lo que se le recomienda una dieta junto con un tratamiento específico.